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노화관련 활성 측정

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작성자 식품공학부 작성일 2013/06/05 조회수 2522
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Senescence-associated β-galactosidase (SA-β-Gal): 노화된 세포에서 특징적으로 관찰되어 노화표지자로 광범위하게 활용됨
노화된 세포에서, pH 6.0에서 lysosome의 β-galactosidase 의 발현양이 증가하여 β-galactoside 결합을 분해

세포주: 섬유아세포 + FBS + DMEM
방법① 6-well plate 세포 분주 3일 후 PBS washing 10분간 3.7% formaldehyde로 고정 2 mM MgCl2 포함한 PBS(pH6.0)로 washing  SA-β-Gal staining buffer [1 mg/ml 5-bromo-4-chloro-3-indolyl -β-galactopyranoside, 5 mM K3Fe[CN]6, 5 mM K4Fe[CN]6, 2 mM MgCL2 포함 PBS (pH6.0) ]에서 37℃로 overnight 반응
방법②: Senescent Cell Staining Kit (Sigma) 사용하여 염색 35 mm plate 분주 2주간 샘플 포함 배지 배양 PBS washing  0.2% glutaraldehyde & 2% formaldehyde로 7분간 고정  40 mM citric acid/phosphate (pH6.0), 5 mM K3Fe[CN]6, 5 mM K4Fe[CN]6, 160 mM NaCl과 2 mM MgCL2 에 1mg/mL 5-bromo-4-chloro-3-indolyl β-galactopyranoside 이 되도록 녹인 용액을 CO2가 없는 37℃에서 24시간 배양  파란색으로 염색된 세포를 광학현미경으로 관찰

식품효소생물공학 이상한

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